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關(guān)于顯微鏡的那些知識(shí)

中科院長春光機(jī)所 ? 來源:中科院長春光機(jī)所 ? 作者:中科院長春光機(jī)所 ? 2020-09-14 09:14 ? 次閱讀
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光學(xué)顯微鏡最關(guān)鍵的零件就是物鏡,也是最難設(shè)計(jì)和裝配的零件,物鏡是由一些列透鏡組裝而成,負(fù)責(zé)將樣品發(fā)出的光匯聚后經(jīng)過目鏡進(jìn)行成像,是光從樣品傳輸?shù)较嗝嫠?jīng)過的第一個(gè)傳輸元件,最接近物體,也因此得名——物鏡。物鏡鏡筒上都會(huì)印有一些代表物鏡信息的標(biāo)識(shí),今天我們一起了解一下物鏡標(biāo)識(shí)所代表的含義。

1.生產(chǎn)廠家:好一點(diǎn)的商業(yè)物鏡上都會(huì)有生廠廠家的字樣,比如ZEISS、LEICA、Nikon、OLYMPUS等,都是常見的顯微物鏡制造商,物鏡品質(zhì)也相對較好。

2.物鏡校正因子:在生產(chǎn)廠家的下面,會(huì)有一些英文字母,Plan、APO、Fluor等,許多初識(shí)物鏡者不能很好的理解這些字母的含義,這些字母是物鏡設(shè)計(jì)時(shí)對像差的矯正級別標(biāo)識(shí),也包括使用場景(比如用于紅外、紫外等不同波長),值得一提的是不同廠家對于不同標(biāo)準(zhǔn)的寫法會(huì)有區(qū)別,但本質(zhì)代表著物鏡的設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn),感興趣的可以自行查閱。光學(xué)透鏡成像經(jīng)常涉及到球差、慧差、像散、場曲、畸變、色差等像差,矯正這些像差對含有多個(gè)透鏡的顯微物鏡尤為關(guān)鍵,根據(jù)矯正程度大致分為以下幾個(gè)級別,如圖,顯微物鏡的銘牌上會(huì)標(biāo)注這些矯正信息,物鏡價(jià)格也會(huì)隨著矯正級別的增加而顯著增加。

消色差物鏡(Achromatic Objective):是實(shí)驗(yàn)室常用的物鏡,消色差物鏡針對藍(lán)光(486nm)和紅光(656nm)兩種波長進(jìn)行垂軸色差矯正,同時(shí)也對546nm波長的光進(jìn)行球差矯正。
平場消色差物鏡(Plan Achromatic Objective):消色差物鏡并沒有進(jìn)行場曲矯正,平場消色差物鏡則是對消色差物鏡進(jìn)行場曲矯正,使得曲面場變成平面。
螢石物鏡(Fluorite Objective):以一種礦物螢石命名,也稱為半復(fù)消色差透鏡(Semi-apochromats),相比消色差物鏡,對更多波長進(jìn)行色差、球差的矯正,也具有更好的成像質(zhì)量。
平場螢石物鏡(Plan Fluorite Objective)同樣平場螢石物鏡沒有進(jìn)行場曲矯正,針對螢石物鏡進(jìn)行場曲矯正,更好的提升成像質(zhì)量。
平場復(fù)消色差物鏡(Plan Apochromatic) 對更多顏色的光進(jìn)行色差、球差矯正,幾乎消除色差,復(fù)消色差透鏡都是帶了場曲矯正,是白光成像的最佳選擇。
在這著重講一下場曲矯正,想要矯正場曲像差,需要在光學(xué)設(shè)計(jì)上增加相當(dāng)多的光學(xué)透鏡,如圖所示為消色差透鏡和平場消色差透鏡的光學(xué)結(jié)構(gòu)對比,透鏡多物鏡的制作成本自然會(huì)升高,但場曲矯正在高端物鏡設(shè)計(jì)中是十分必要的,尤其對于復(fù)消色差物鏡。

3.放大倍率:物鏡上會(huì)標(biāo)有放大倍率:10X、20X、50X、100X等,放大倍率是我們選擇顯微物鏡時(shí)主要考慮因素之一,但我們買的物鏡上標(biāo)有50X,在我們使用中真的就放大50倍嗎?

實(shí)際上物鏡的放大倍率取決于鏡筒透鏡和物鏡的焦距,公式如下:

不同廠商的物鏡是根據(jù)自己的顯微鏡設(shè)計(jì)的,因此只有用在自己的顯微鏡上才是標(biāo)注的放大倍率。那如果把物鏡應(yīng)用在其他顯微鏡或者自制顯微鏡上呢?每個(gè)廠家的顯微鏡鏡筒透鏡焦距是固定的,如下圖:

根據(jù)公式我們可以計(jì)算出不同廠家物鏡的焦距,在根據(jù)你所使用的顯微鏡的鏡筒透鏡焦距,可以計(jì)算出放大倍率。比如Nikon50X物鏡的焦距為200/50=4mm,如果應(yīng)用在Olympus顯微鏡上,則放大倍率為180/4=45X。
4.數(shù)值孔徑:數(shù)值孔徑(Numerical Aperture,NA)是顯微物鏡的重要參數(shù),是焦距與入瞳直徑的函數(shù):

顯微物鏡的光學(xué)分辨率Resolution = λ/2n(sin(θ)),可將NA決定著顯微鏡的分辨率,NA值越大,其分辨率越高,NA中的n指的是工作介質(zhì)的折射率,空氣中n=1,θ不超過90°,因此空氣介質(zhì)中的NA最大不超過1,若想提升NA,可以更換介質(zhì),比如浸潤在油中。
5.蓋玻片厚度:有些生物顯微鏡在使用時(shí)需要在樣品上蓋一個(gè)蓋玻片其厚度通常為0.17mm,針對這種應(yīng)用的顯微物鏡在設(shè)計(jì)時(shí)就考慮到這0.17mm的距離矯正,其銘牌上也會(huì)標(biāo)注,如圖所示。

6.有限遠(yuǎn)共軛&無限遠(yuǎn)共軛:這里的有限遠(yuǎn)、無限遠(yuǎn)共軛指的是物面與像面這兩個(gè)共軛面而言的,有限遠(yuǎn)共軛顯微物鏡:從樣品散射的光被物鏡匯集到一點(diǎn),然后通過目鏡成像,有限共軛顯微鏡有兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)DIN(Deutsceh Industrie Norm)、JIS(JapaneseIndustrial Standard),如圖所示。對于這兩種標(biāo)準(zhǔn)的顯微鏡,有幾個(gè)長度需要注意,機(jī)械筒長(MechanicalTube Length, MTL)、光學(xué)筒長(Optical Tube Length, OTL)、齊焦距(Parfocal Distance)。關(guān)于這三個(gè)長度的定義如下:

機(jī)械筒長:從物鏡安裝面到目鏡安裝面的距離,即物鏡凸緣到目鏡凸緣的距離。

光學(xué)筒長:從物鏡后焦面到中間像面的距離。

齊焦距:從物鏡安裝面(物鏡凸緣)到觀察物體所在平面的距離。

這兩種標(biāo)準(zhǔn)物鏡的安裝螺紋規(guī)格都是RMS(0.7965" x 36TPI

無限遠(yuǎn)共軛顯微物鏡:從樣品散射出的光經(jīng)過物鏡后呈平行光束,通過在物鏡與目鏡之間加一個(gè)管透鏡來成中間像,這種現(xiàn)代的顯微鏡設(shè)計(jì)方式較傳統(tǒng)顯微鏡設(shè)計(jì)多了一個(gè)透鏡,但卻使得顯微鏡的配置更加靈活,及時(shí)物鏡與管透鏡之間的距離變化,也不改變放大倍率,不受之前的距離限制,方便在顯微鏡中擴(kuò)展熒光等成像模塊以及濾光片等,現(xiàn)在顯微鏡系統(tǒng)多采用無限遠(yuǎn)共軛顯微鏡。


原文標(biāo)題:聊聊顯微物鏡的有關(guān)知識(shí)

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