泵、色譜柱及檢測器是HPLC的三大關(guān)鍵組成部分。樣品經(jīng)色譜柱分離后隨流動相共同進(jìn)入檢測器,檢測器將樣品的物理或化學(xué)信號轉(zhuǎn)換為電信號,得到樣品組分分離的色譜圖。
HPLC檢測器分為溶質(zhì)型和總體檢測器兩類??傮w檢測器對色譜柱中全部流出物的特性產(chǎn)生響應(yīng)(包括樣品及流動相),如示差折光檢測器;而溶質(zhì)型檢測器只對待測樣品的物理化學(xué)特性產(chǎn)生響應(yīng),例如紫外檢測器。
紫外-可見吸收檢測器 (ultraviolet-visible detector, UVD)
UVD適用于對紫外或可見光有吸收的樣品,分為固定波長和可調(diào)波長型兩類。UVD靈敏度高,線性范圍寬,對流速和溫度變化不敏感,可用于梯度淋洗。
光電二極管陣列檢測器 (photodiode array** d**etector, PDAD/DAD/PDA/PAD)
原理與UVD相同,區(qū)別在于PAD可檢測到所有波長的吸收值,是全掃描光譜圖。PAD的優(yōu)點(diǎn)是可以獲得樣品組分的全部光譜信息。
熒光檢測器 (fluorescence detector, FLD)
FLD適用于具有熒光的樣品,一定條件下,熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度成正比。FLD靈敏度和選擇性好,檢出限高,缺點(diǎn)是適用范圍具有局限性。
示差折光檢測器 (refractive index detector, RID)
RID是基于通過測定色譜柱流出物導(dǎo)致的光折射率的變化,來測量樣品的濃度。根據(jù)原理RID分為偏轉(zhuǎn)式和反射式兩種。RID是一種通用型檢測器,但其對溫度及溶劑組成變化敏感,不能用于梯度淋洗。
電化學(xué)檢測器 (elctrochemical detector, ED)
ED包括介電型、電導(dǎo)型、電位型和安培型四種。介電型通過測定介質(zhì)介電常數(shù)的變化來測定樣品濃度,電導(dǎo)型通過測定樣品電離導(dǎo)致介質(zhì)電導(dǎo)率的變化,電位型通過測定電流為零時(shí)電極之間電位的差值,安培型通過測定特定電位下電流的差值來測定樣品的濃度。安培型電化學(xué)檢測器相對于電位型應(yīng)用要更為普遍。
蒸發(fā)光檢測器 (evaporation light-scatter detector, ELSD)
ELSD是基于光線通過微小的粒子會產(chǎn)生光散射現(xiàn)象的原理。樣品經(jīng)色譜柱分離后會被氮?dú)鈬姙殪F狀液滴,云霧狀溶質(zhì)顆粒通過光路后產(chǎn)生光散射。ELSD要優(yōu)越于RID,靈敏度及檢出限高,對溫度敏感程度低,適用于梯度淋洗。
質(zhì)譜檢測器 (mass spectrometry detector, MSD)
MSD靈敏度高,專屬型強(qiáng)
評價(jià)液相色譜檢測器有一些共同的性能指標(biāo),例如噪聲、漂移、靈敏度、檢測限、線性范圍等。
- 噪聲 :檢測器輸出的與待測樣品無關(guān)的波動信號
- 漂移 :基線隨時(shí)間推移向上或向下偏離
- 靈敏度 :一定量物質(zhì)通過檢測器所產(chǎn)生響應(yīng)值的大小
- 檢測限 :產(chǎn)生可辨認(rèn)樣品峰所需的最低樣品量
- 線性范圍 :檢測器的響應(yīng)值與樣品量保持線性關(guān)系的樣品量范圍值
- 死體積 :由樣品池體積及樣品池到色譜柱連接管路體積兩部分組成
- 響應(yīng)時(shí)間 :檢測器跟蹤樣品組分濃度變化的快慢程度
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