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新冠檢測技術(shù)的差異探討

BrCk_zhenfund ? 來源:真格基金 ? 作者:真格基金 ? 2020-06-23 17:04 ? 次閱讀
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后新冠時期,醫(yī)療行業(yè)正在成為新的風(fēng)口。

醫(yī)療行業(yè)是一個非常多變的系統(tǒng),受政策影響巨大。創(chuàng)業(yè)者要快速捕捉需求方面微妙的變化,回應(yīng)各個層次的機遇,才能把機會握在手中。

直面挑戰(zhàn)與機遇是創(chuàng)業(yè)者和投資者永恒的主題。真格基金不僅關(guān)注技術(shù),也希望思考醫(yī)療創(chuàng)業(yè)生態(tài)之間的相互關(guān)聯(lián)性。目前,真格基金已經(jīng)投出 57 個醫(yī)療項目,其中發(fā)展到 B 輪及之后的有 15 個。

真格基金投資的醫(yī)療領(lǐng)域項目

5 月 30 日,真格基金聯(lián)合未來論壇共同舉辦了「真格精釀 x 未來·局 ——全球新冠病毒檢測差異與機遇」,在特殊時期,越洋連線,共同探討新冠病毒檢測的技術(shù)、應(yīng)用與創(chuàng)新以及檢測行業(yè)的機會與挑戰(zhàn)。

本文要點導(dǎo)讀:

· 新冠檢測各項技術(shù)的差異

· 新冠自行居家檢測的可行性之辯

· 新冠激發(fā)下的體外檢測行業(yè)發(fā)展前景

針對新冠的檢測有兩大類,一類是針對病毒的檢測,另一類是針對非病毒的檢測,也就是人體的檢測。本次討論集中在針對病毒的檢測中,最被廣泛使用的核酸檢測。

新冠病毒檢測方法概覽

各種核酸檢測技術(shù)的差異

新冠檢測技術(shù)差異探討

01走近大眾的 PCR 技術(shù)

新冠病毒是一種蛋白質(zhì)包裹的 RNA 病毒,RNA 是核酸的一種。這次的新冠疫情讓很多人第一次知道核酸檢測的概念。

核酸檢測中目前普遍使用的是實時熒光定量 PCR 技術(shù),它對實驗操作以及專業(yè)性要求非常高。銳訊生物創(chuàng)始人王雅琦介紹,新冠病毒 PCR 檢測一般包括四個步驟:

新冠病毒PCR檢測四大步驟圖源:銳訊生物創(chuàng)始人兼董事長王雅琦演講PPT

任何步驟出現(xiàn)問題,都會造成 RNA 降解或損失,最后影響準(zhǔn)確度。這就對檢測技術(shù)的靈敏度提出了更高要求。

核酸檢測是目前由很多國家認證的新冠病毒確診“金標(biāo)準(zhǔn)”。從臨床樣本中分離出新冠病毒后,國家藥監(jiān)局針對核酸檢測發(fā)布一系列診療方案,診斷標(biāo)準(zhǔn)不斷擴充。最早加入抗體、抗原的檢測,又增加來自不同部位的標(biāo)本,包括痰液、肺泡灌洗液、咽拭子,到糞便、尿液、血清等。

有一部分病人體內(nèi)可能只有微量的病毒殘留,傳統(tǒng) PCR 技術(shù)無法穩(wěn)定檢出,造成多次結(jié)果時而陰、時而陽的現(xiàn)象,這也解釋了為什么有些病人要檢測多次才能確診。

部分出院后的病人出現(xiàn)了復(fù)陽,也是由于出院病人本身體內(nèi)的痕量殘留病毒在住院前未被檢出造成的。

傳統(tǒng) PCR 技術(shù)的缺陷,凸顯了高靈敏度檢測手段的重要性。

銳訊生物在完成大量重復(fù)性實驗之后發(fā)現(xiàn),數(shù)字 PCR 的三點優(yōu)勢是傳統(tǒng) PCR 無法比擬的。

1)數(shù)字 PCR 可以更準(zhǔn)確地檢測病人治療后的情況

他們在實驗中發(fā)現(xiàn),有一位病人在 1 月 23 日被發(fā)現(xiàn)核酸檢測陽性,經(jīng)過醫(yī)治后,2 月 5 日、6 日兩次核酸檢測都是陰性,隨后出院。2 月 21 日,病人回醫(yī)院復(fù)查時,復(fù)陽了。在利用數(shù)字 PCR 技術(shù)對這位病人三個時間節(jié)點的樣本進行回溯性研究時發(fā)現(xiàn),病人的幾次檢測都是陽性,不符合出院標(biāo)準(zhǔn)。

2)數(shù)字 PCR 提供的定量結(jié)果是非常直觀的解讀

在數(shù)字 PCR 和傳統(tǒng) PCR 靈敏度的臨床對比實驗中,他們觀察到,在原始樣本中,PCR 的 CT 值 35,即所謂的陽性樣本。數(shù)字 PCR 可以穩(wěn)定檢出 131 個拷貝。進行 25 倍的稀釋后,數(shù)字 PCR 仍可穩(wěn)定檢出 2-3 個拷貝,但傳統(tǒng) PCR 已無法檢出。

傳統(tǒng) PCR 與數(shù)字 PCR 靈敏度臨床對比

3)數(shù)字 PCR 的另一大優(yōu)勢是實時檢測病人的治療情況

銳訊生物在對 12 位病人治療過程的不同時間節(jié)點采樣后一一檢測后發(fā)現(xiàn),病情載量呈非常清晰的下降趨勢。數(shù)字 PCR 技術(shù)可以有效地支持新冠病人的治療全過程。過去幾個月,他們的技術(shù)也被武漢醫(yī)院用于假陰病人檢測、出院病人復(fù)核以及醫(yī)護人員等高風(fēng)險人群的篩查。

02“撒網(wǎng)捕魚”的 NGS 技術(shù)

核酸檢測的另一項重要手段是 NGS 技術(shù),它最大的優(yōu)勢是鑒定未知病原體。

SARS 發(fā)生后,科學(xué)界用 4 個月時間鑒定出 SARS 病原體是冠狀病毒。新冠 12 月 15 日出現(xiàn)第一個病人后,科學(xué)界只用了兩周時間便確定是新型冠狀病毒。

“不知道面對的敵人是誰時,是非常茫然的,這意味著很難進行針對性的治療?!钡乾F(xiàn)在一切都不一樣了。

杰毅生物創(chuàng)始人王珺對現(xiàn)在的技術(shù)有充分的信心,他表示 NGS 不需要培養(yǎng),也不需要前期假設(shè),無需知道面對的是新冠病人、甲流病人還是結(jié)核病人。它最大的優(yōu)點是一次性可以把細菌、病毒、真菌、寄生蟲,人類常見的病原體一網(wǎng)打盡。

王珺把它定義為“撒網(wǎng)捕魚”。不再是傳統(tǒng)的定向方法每次針對一種或多種病原體進行釣魚式檢測,而是一次性把池塘里所有的魚都打撈上來。

新冠疫情初期,人們不知道面對何種病原體,NGS 的作用便開始發(fā)揮。參考《Nature》2020 年的一篇論文,常規(guī)檢測方法可以檢測 85% 左右的基因組,杰毅生物開發(fā)的新冠 mNGS 試劑盒可以測到新冠 99.8% 基因組,相當(dāng)于把病原體基因組全部覆蓋,檢測新冠外,還可以檢測另外 16000 多種病原體。

王珺指出,這種手段也存在問題,手工操作非常復(fù)雜。他們一直想把這種診斷做的更簡單,于是推出了全自動機器 NGSmaster。NGSmaster 的最大優(yōu)勢是可以一體化完成核酸提取、文庫構(gòu)建,速度非??臁T谒膸椭?,最短 16.5 小時出 DNA 檢測報告,18 小時出 RNA 檢測報告。

杰毅生物三月初被邀請去武漢金銀潭醫(yī)院。當(dāng)時,新冠的鑒定沒有太大的技術(shù)挑戰(zhàn),但出現(xiàn)了很多危急重病人。病人長時間住院以后,出現(xiàn)了各種院內(nèi)感染和自身免疫低下引起的其他感染。因此當(dāng)時通過外送樣本進行基因組測試很難開展,他們在醫(yī)院的支持下,建立了二代測序中心,利用這臺設(shè)備為 300 多位新冠病人進行 NGS 檢測,對當(dāng)時金銀潭醫(yī)院診治病人提供了巨大的幫助。

經(jīng)過此次疫情,NGS 鑒定未知病原體的地位得到明顯確定。

03CRISPR 技術(shù)與居家應(yīng)用之辯

除了數(shù)字 PCR 與 NGS 之外,本次疫情中還有一項引起討論的新技術(shù):CRISPR。

在王珺看來,CRISPR 是一項不錯的技術(shù),優(yōu)點明顯:速度快,靈敏度好。杰毅生物推出的 SMAP 儀,是中國首家基于基因編輯技術(shù)的流水線式分子檢測平臺。隨到隨檢,90 分鐘出結(jié)果,高通量檢測,8 個小時完成 400 個樣本。

斯坦福大學(xué)病理系及遺傳學(xué)系助理教授叢樂也在關(guān)注 CRISPR,他看好這項技術(shù),但不提倡把它作為一個居家檢測的方式,因為自主居家檢測會出現(xiàn)極大隱患。若病人自行檢測出感染新冠,受各種社會因素影響,他可能不會去醫(yī)院,也不接受隔離。這對疫情的控制是非常不利的。

叢樂認為不管是 CRISPR 還是其他快速檢測技術(shù),對于新冠病毒來說,重要的是在關(guān)鍵場景下的控制,比如機場。一旦檢測出問題,可以馬上有組織地就地隔離,這是非常有效的,但在居家檢測的應(yīng)用要十分小心。

在居家檢測領(lǐng)域,抗體檢測更為方便。它可以使用唾液等直接進行,不需要儀器或設(shè)備,幾分鐘即可得到結(jié)果。這是比較新的技術(shù),在 HIV 病毒檢測領(lǐng)域已經(jīng)取得了很好的臨床效果。

杭州醫(yī)學(xué)院研究員金大智則認為新冠的居家檢測非常有必要。對居家檢測來說方便是最好的,操作簡單又可以緩解大醫(yī)院的壓力,減少院內(nèi)交叉感染風(fēng)險。很多快速核酸檢測儀器 20 分鐘之內(nèi)就能完成整個循環(huán)。包括 CRISPR 技術(shù)以及其他 POCT 檢測最終都有望用在家庭中。

金大智承認居家檢測會出現(xiàn)假陽性的問題,但這是技術(shù)允許的容錯范圍,相比于臨床檢測而言,它的指標(biāo)要求要低,“居家檢測一定是未來很好的發(fā)展方向”。

新冠檢測的現(xiàn)狀與未來

毋庸置疑,新冠檢測技術(shù)一定會繼續(xù)變革出新,在醫(yī)學(xué)治療的強需求結(jié)束之后,它將面對更多樣的現(xiàn)實。了解新冠檢測的現(xiàn)狀,才能更加明白它為 IVD (體外檢測)行業(yè)提供的機會。

1)國內(nèi)外新冠檢測現(xiàn)狀

因為疫情爆發(fā)的時間及發(fā)展情況的不同,各國新冠檢測面臨的問題開始出現(xiàn)差異。

據(jù)艾科諾生物創(chuàng)始人楊星介紹,美國的新冠檢測主要是在實驗室進行。目前,美國在新冠檢測方面最大的問題是供不應(yīng)求,儀器、試劑、采樣拭子、樣本保存液,都缺。以往,美國醫(yī)院或者實驗室做檢測,都會選擇一家公司的產(chǎn)品,但現(xiàn)在由于產(chǎn)品供不應(yīng)求,有 57% 的大學(xué)醫(yī)院和社區(qū)醫(yī)院都在用超過三個公司的產(chǎn)品。

圖源:https://www.cdc.gov

國內(nèi)核酸檢測從一月份到四月底這段時間,診斷試劑用量和使用方法都出現(xiàn)了模式的變化。金大智介紹,最開始國內(nèi)都是以核酸檢測為主,后來免疫診斷試劑逐漸占有了部分核酸檢測市場,但占大比重的依然是核酸檢測。

目前國內(nèi)新冠檢測從醫(yī)院病人的檢測轉(zhuǎn)到了復(fù)工復(fù)產(chǎn)復(fù)學(xué)的檢測,這給方法學(xué)帶來很大挑戰(zhàn),到底用核酸還是用免疫學(xué)的方法,爭議很大。金大智認為目前從大量醫(yī)院病人的檢測轉(zhuǎn)到很多常規(guī)檢測的具體方法還有待進一步討論。

可以肯定的是,新冠檢測市場依然維持著很大容量。資深體外診斷從業(yè)者許靜波介紹,目前,整個 IVD 行業(yè)的公司超過一千家。從業(yè)者有一個基本的共識是 IVD 行業(yè)在國內(nèi)有一百多億的市場,全球市場接近兩百多億。他尤其指出,在剛剛結(jié)束的兩會上,李克強總理提出要迭代,希望儀器是標(biāo)本進結(jié)果出,這也是給 IVD 行業(yè)釋放出的一種新的信號。

艾科諾團隊從 2018 年開始開發(fā)“樣本進、結(jié)果出”的全自動分子診斷測試平臺和用于流感檢測的試劑盒(甲流、乙流、合胞病毒)。今年冬天很可能會看到流感和新冠同時存在的場景,艾科諾團隊希望提供一個發(fā)熱病人診斷的綜合方案,在他們的儀器平臺一個小時內(nèi)同時完成流感和新冠病毒病毒的檢測,實現(xiàn)快速診斷和患者分流。

2)IVD 行業(yè)的發(fā)展趨勢 許靜波認為新冠引爆了 IVD 行業(yè),特別是核酸檢測的發(fā)展。IVD 的發(fā)展歷來都是從半自動、全自動,再到高速,核酸檢測也應(yīng)基于這個技術(shù)路線。不同的是要在現(xiàn)有的技術(shù)上細化,他指出,在臨床需求上,PCR 技術(shù)產(chǎn)生以來做的基本上是病原檢測,以后可能要讓核酸檢測在藥物基因組學(xué)方面發(fā)揮更大作用。

北美華人臨床化學(xué)家協(xié)會候任主席王永強博士認為 IVD 行業(yè)大有可為,因為技術(shù)更新、發(fā)展太快,國際同行、產(chǎn)學(xué)研各環(huán)節(jié)應(yīng)該加強交流。他認為通過新冠,可以看到 IVD 的發(fā)展將是兩極化的,一種是高尖深的全自動一體化平臺,第二種是小型 POCT 床旁化家庭化平臺。

申報 FDA:落地全球市場

面對近兩百億的全球市場,中國的企業(yè)勢必要走出去,出海過程中很重要的一步是落地市場。

王永強介紹了申報 FDA 緊急使用授權(quán)的攻略和技巧。5 月 11 日 FDA 推出新的政策,針對不同的檢測手段制定了相應(yīng)的模版,企業(yè)在申報時要找到針對自己產(chǎn)品和測試的模版。模版的填寫是彰現(xiàn)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、符合法律法規(guī)要求、展示產(chǎn)能產(chǎn)銷和市場供應(yīng)能力的關(guān)鍵。

王永強介紹,目前國內(nèi)已經(jīng)有六個制造商申請到了 EUA。更可喜的是截止 6 月 9 日,共有 91 個 EUA 被批準(zhǔn)。他認為新冠毋庸置疑是全世界的災(zāi)難,但從科學(xué)研究的角度來講,EUA 是不斷出新的事情,新技術(shù)、新的檢測方法不斷帶給人們驚喜。

更多申請 EUA 所需文件、模版、流程及操作步驟可以直接在 FDA 官網(wǎng)進行查閱:https://www.fda.gov/emergency-preparedness-and-response/mcm-legal-regulatory-and-policy-framework/emergency-use-authorization

大部分人往往更關(guān)注宏觀公共衛(wèi)生政策,覺得離商業(yè)科研很遠。真格基金聯(lián)合創(chuàng)始人王強提醒企業(yè)家,其實這些政策恰是引領(lǐng)科研、商業(yè)方向最重要的指南。

要依據(jù)市場需求微妙或迅速發(fā)生的轉(zhuǎn)向,調(diào)整企業(yè)應(yīng)對的策略和研發(fā)的方法學(xué)。只有立基在扎實的方法論基礎(chǔ)之上,科研方向和企業(yè)運作方向才會步入正軌,才能及時有效應(yīng)對復(fù)雜的市場變化。

“作為企業(yè)共同體、商業(yè)共同體、科研共同體,我們共同改變中國乃至世界,締造更偉大的人類未來生存的美好空間?,F(xiàn)在世界發(fā)生了令人憂慮的事情,但從歷史規(guī)律來說,這些都將像鐘擺一樣,多遠甩出去,最后都會回到原地。因為,歷史無數(shù)次證明了這樣的規(guī)律——追求真、追求至善、追求美好的東西注定是作為命運共同體的人類存在的全部要義?!?br /> 責(zé)任編輯:pj

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    的頭像 發(fā)表于 08-30 12:30 ?519次閱讀
    【電磁兼容<b class='flag-5'>技術(shù)</b>案例分享】對地電容接地點<b class='flag-5'>差異</b>導(dǎo)致輻射發(fā)射問題解決案例